Kiek kainuoja perrišimo transformavimas?

2024 Autorius: Miles Stephen | [email protected]. Paskutinį kartą keistas: 2023-12-15 23:38

Transformacija . Įpilkite 1–5 µl perrišimas mišinį į kompetentingas ląsteles transformacija . Prailgintas perrišimas su PEG sukelia sumažėjimą transformacija efektyvumas (greitas Perrišimas rinkinys). Elektroporacija rekomenduojama didelėms konstrukcijoms (>10 000 bp).

Taigi, kiek perrišimo produkto man reikia transformacijai?

Transformacija . Įpilkite 1–5 µl perrišimas mišinį į kompetentingas ląsteles transformacija . Prailgintas perrišimas su PEG sukelia sumažėjimą transformacija efektyvumas (greitas Perrišimas rinkinys). Elektroporacija rekomenduojama didelėms konstrukcijoms (>10 000 bp).

Vėliau kyla klausimas, kas yra perrišimas ir transformacija? Įprasto klonavimo eksperimento metu mokslininkai pirmiausia įterpia DNR gabalėlį, pavyzdžiui, geną, į apskritą DNR gabalėlį, vadinamą plazmide. Šiame etape naudojami restrikcijos fermentai ir DNR ligazė ir jis vadinamas a perrišimas . Po a perrišimas , kitas žingsnis yra DNR perkėlimas į bakterijas tokiu procesu, kuris vadinamas transformacija.

Vėliau taip pat galima paklausti, kiek DNR reikia perrišimui?

Bendra vektoriaus + intarpo koncentracija turi būti nuo 1 iki 10 Μg/ml, kad būtų veiksminga perrišimas . Vektorius: rekomenduojamas įterpimo molinis santykis nuo 1:1 iki 1:10 (tipinis yra 1:3). Jei nesate tikri dėl savo DNR koncentracijos, atlikti kelis perrišimus įvairiais santykiais.

Kiek laiko galite laikyti perrišimo reakciją?

Ryšiai gali daryti kambario temperatūroje arba vėsesnėje (pagalvokite, 12-16°C) per naktį ar net kelias dienas, jei tu tikrai užsiėmę. Tu gali taip pat laikyti perrišimą į šaldytuvą ir vėliau išimkite, kad toliau rištumėte kambario temperatūroje kaip ilgas kaip reikia.