Kaip DNR koncentracija apskaičiuojama naudojant spektrofotometrą?
Kaip DNR koncentracija apskaičiuojama naudojant spektrofotometrą?

Video: Kaip DNR koncentracija apskaičiuojama naudojant spektrofotometrą?

Video: Kaip DNR koncentracija apskaičiuojama naudojant spektrofotometrą?
Video: Biologija. Baltymų nustatymas Bradfordo metodu 2024, Lapkritis
Anonim

DNR koncentracija yra įvertino išmatuojant absorbciją esant 260 nm, sureguliuojant A260 drumstumo matavimas ( matuojamas pagal absorbcija prie 320 nm), dauginant pateikė praskiedimo koeficientas ir naudojant santykiai su A260 1,0 = 50 µg/ml grynos dsDNR.

Žmonės taip pat klausia, kaip rasti DNR koncentraciją ir grynumą?

Įvertinti DNR grynumas , išmatuokite absorbciją nuo 230 nm iki 320 nm, kad aptiktumėte kitus galimus teršalus. Dažniausiai grynumo skaičiavimas yra absorbcijos prie 260 nm santykis, padalytas iš rodmens esant 280 nm. Gera kokybė DNR turės A260/A280 santykis 1,7–2,0.

Be to, kas yra gera DNR koncentracija? A Gerai kokybės DNR pavyzdyje turi būti A260/A280 santykis 1,7-2,0 ir A260/A230 santykis yra didesnis nei 1,5, bet kadangi skirtingų metodų jautrumas šiems teršalams skiriasi, šios vertės turėtų būti laikomos tik jūsų mėginio grynumo gairėmis.

Kalbant apie tai, kaip NanoDrop apskaičiuoja DNR koncentraciją?

Padauginate absorbcijos vertę esant 260 nm iš fiksuoto koeficiento (tai yra 50 DNR ) ir gausite DNR koncentracija . Voilá. (Gerai, techniškai tai yra 10 mm storio mėginio A260, padaugintas iš 50; NanoDrop išreiškia A260 taip, lyg mėginys būtų 10 mm storio, kaip standartinėje kiuvetėje).

Kodėl mes turėjome naudoti spektrofotometrą, kad įvertintume savo DNR?

A spektrofotometras yra gali nustatyti vidutines nukleorūgščių koncentracijas DNR arba RNR, esančios mišinyje, taip pat jų grynumas. Naudojant Beer-Lambert įstatymas tai yra galima susieti sugertos šviesos kiekį su sugeriančios molekulės koncentracija.

Rekomenduojamas: