Koks yra PGR produkto gryninimo tikslas?
Koks yra PGR produkto gryninimo tikslas?

Video: Koks yra PGR produkto gryninimo tikslas?

Video: Koks yra PGR produkto gryninimo tikslas?
Video: Introducing the Profinia™ Protein Purification System 2024, Lapkritis
Anonim

Valymas DNR iš a PGR reakcija paprastai reikalinga tolesniam naudojimui ir palengvina fermentų, nukleotidų, pradmenų ir buferio komponentų pašalinimą. Tradiciškai tai buvo atliekama naudojant organinius ekstrahavimo metodus, tokius kaip fenolio chloroformo ekstrahavimas, po to nusodinant etanoliu.

Taip pat kyla klausimas, kodėl būtina išvalyti PGR produktus?

Tau reikia išvalyti PGR produktus atsikratyti nepanaudotų pradmenų, nukleotidų ir fermentų, siekiant optimizuoti ligavimo sėkmę, kuri išlaikys ir seka produktas apie PGR . Į išvalyti į PGR produktai , naudojama dydžio išskyrimo chromatografija.

Be to, ką turėčiau daryti po PGR? Kad atsigavimas būtų kuo didesnis, du kartus praskalaukite sulaikytą puodelį 10–20 µL TE arba vandens. Galutinis PGR Reakcijoje gali būti iki mikrogramų amplifikuotos DNR, kuri gali būti naudojama įvairiems molekulinės biologijos tikslams. Šios programos gali būti daugiau ar mažiau jautrios likusiems komponentams PGR reakcijos mišinys.

Taip pat galima paklausti, kaip valote PGR produktus?

Klasikiniai metodai naudojami švarus aukštyn PGR produktai prieš sekos nustatymą apima gelio elektroforezę, nusodinimą etanoliu ir kolonėlės chromatografiją. Nors šie metodai yra gana veiksmingi, jie gali greitai tapti sudėtingi, kai lygiagrečiai apdorojami keli mėginiai ir gali būti įvairaus laipsnio mėginių praradimas.

Kodėl reikia išvalyti DNR?

Mes švarus aukštyn DNR iš vandeninių tirpalų pašalinti buferines druskas, fermentus ar kitas medžiagas, kurios gali turėti įtakos tolesniam naudojimui. Pavyzdžiui, PGR reakcija švarus aukštyn, švarus iki po apribojimo virškina ir švarus genomo ar plazmidės DNR užterštos ląstelių baltymais / šiukšlėmis.

Rekomenduojamas: